熒光-PCR法是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程。PCR擴(kuò)增時加入一對引物和一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，淬滅基團(tuán)抑制報告基團(tuán)的熒光發(fā)射。剛開始時，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，報告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)發(fā)生分離，抑制作用被解除，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析進(jìn)而得到一條熒光擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線分熒光背景信號階段、熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期三個階段。指數(shù)期的PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，因此我們選擇在這個階段進(jìn)行定量分析，計算出待測樣品初始模版的量。